7. Thuốc thử

7.1. Nước thuốc thử, không làm ảnh hưởng đến giới hạn phát hiện các thành phần cần xác định. Chuẩn bị bằng cách cho nước vòi đi qua nền lọc cacbon có chứa khoảng 0,5 kg cacbon hoạt tính, bằng chưng cất hoặc bằng cách sử dụng hệ thống làm tinh khiết nước1) ¹⁾

7.2. Các vật liệu nhồi bẫy

7.2.1. 2,6-diphenylen oxit polyme, 60/80 mesh, cấp sắc ký.

7.2.2. Chất nhồi metyl silicon, 3 OV-1.

7.2.3. Silica gel, 35/60 mesh.

7.3. Metanol, loại chuyên dụng.

7.4. Axit clohydric HCl, 1:1.

7.5. Vinyl clorua, độ tinh khiết 99,9 %.

...

...

...

7.7. Dung dịch tiêu chuẩn gốc

Chuẩn bị từ các vật liệu tiêu chuẩn tinh khiết hoặc mua các dung dịch đã được chứng nhận. Chuẩn bị các dung dịch tiêu chuẩn gốc trong metanol bằng cách sử dụng các chất lỏng hoặc khí đã phân tích. Cảnh báo: Các chất độc hại. Xem điều 5.

Cho khoảng 9,8 ml metanol vào bình định mức có nút thủy tinh nhám. Để yên không đậy nút trong 10 min hoặc cho đến khi tất cả bề mặt dính cồn khô đi. Cân bình chính xác đến 0,1 mg.

Thêm các chất chuẩn đã phân tích như sau: đối với các chất lỏng, sử dụng xylanh dung tích 100  hoặc pipet thủy tinh đầu mao quản sử dụng một lần, ngay lập tức thêm hai giọt hoặc nhiều hơn các chất chuẩn đã phân tích vào bình định mức, sau đó cân lại. Đảm bảo các giọt nhỏ chính xác vào cồn mà không rơi vào cổ bình. Đối với khí halocacbon có nhiệt độ sôi dưới 30 ^oC (bromometan, cloroetan, clorometan, dicloroflorometan, tricloroflorometan, vinyl clorua), gắn ống nhựa vinyl vào đầu bình khí chứa chất chuẩn, với đầu mở sục khí vào cốc metanol chảy qua ống lắp xylanh có van kín khí dung tích 5 ml vào ống và từ từ hút khí vào trong xylanh đến vạch 5 ml. Hạ thấp xylanh xuống 5 mm bề mặt metanol và từ từ cho khí lên trên bề mặt. Khí sẽ hòa tan trong metanol và nhìn thấy như một xoáy nước khi nó hòa tan trong dung môi. Cân lại bình định mức (khác nhau là số lượng khí được hòa tan trong metanol), pha loãng đến thể tích, đóng nút lại và lắc đảo ngược nhiều lần. Tính nồng độ bằng từ khối lượng tịnh. Khi độ tinh khiết hợp chất được phân tích đạt 96 % hoặc lớn hơn, tính nồng độ của dung dịch tiêu chuẩn gốc từ khối lượng chưa hiệu chỉnh. Tốt nhất là sử dụng các dung dịch tiêu chuẩn gốc thương phẩm có nồng độ bất kỳ nếu chúng được chứng nhận bởi các nhà sản xuất. Cho dung dịch tiêu chuẩn gốc vào bình có nút vận TFE. Bảo quản bình tại nhiệt độ - 10 ^oC đến – 20 ^oC, tránh ánh sáng.

7.8. Các dung dịch tiêu chuẩn pha loãng thứ cấp

Sử dụng các dung dịch tiêu chuẩn gốc, chuẩn bị trong metanol các dung dịch tiêu chuẩn pha loãng thứ cấp có chứa các hợp chất cần phân tích, hoặc đơn lẻ hoặc được trộn vào với nhau. Chuẩn bị các dung dịch tiêu chuẩn pha loãng thứ cấp tại các nồng độ cho phép các dung dịch tiêu chuẩn hiệu chuẩn (7.10) nằm trong dải làm việc của hệ thống phân tích. Bảo quản các dung dịch tiêu chuẩn pha loãng thứ cấp có khoảng cách chứa tối thiểu trong tủ lạnh và kiểm tra thường xuyên dấu hiệu bay hơi (điều này chỉ ra sự cần thiết đối với việc tái sinh). Luôn luôn để ở nhiệt độ phòng trước khi chuẩn bị các dung dịch tiêu chuẩn hiệu chuẩn. Đối với các chất khí các dung dịch tiêu chuẩn sử dụng được trong 1 tuần. Các dung dịch tiêu chuẩn khác sử dụng được trong 1 tháng hoặc ít hơn nếu so sánh với các dung dịch tiêu chuẩn kiểm tra thấy có vấn đề.

7.9. Dung dịch nội chuẩn/thay thế dung dịch tiêu chuẩn bổ sung đã biết

Chuẩn bị dung dịch có chứa florobenzen (nội chuẩn) và 1,2-diclobenzen-d₄ (thay thế) trong metanol. Dung dịch nội chuẩn khác và các hợp chất thay thế có thể được sử dụng miễn là đáp ứng được phương pháp và không cản trở đến bất kỳ phương pháp phân tích nào. Chuẩn bị dung dịch tiêu chuẩn pha loãng thứ cấp có nồng độ 5  của từng hợp chất. Thêm 5,0  dung dịch tiêu chuẩn vào 25,0 ml mẫu hoặc dung dịch tiêu chuẩn hiệu chuẩn tạo ra nồng độ tương đương 1,0 . Nồng độ tiêu chuẩn thứ cấp khác có thể được sử dụng nếu thể tích bổ sung được điều chỉnh phù hợp và đáp ứng được tất cả các tiêu chí dung dịch nội chuẩn. Thêm hỗn hợp này vào từng mẫu dung dịch tiêu chuẩn và mẫu trắng.

7.10. Dung dịch tiêu chuẩn hiệu chuẩn

...

...

...

8. Cách tiến hành

8.1.  Điều kiện tiến hành

Bảng 2 tóm tắt các điều kiện tiến hành được khuyến nghị đối với sắc ký và đưa ra thời gian lưu ước lượng và MDLs mà có thể đạt được ở những điều kiện này. Ví dụ sự tách thu được với cột cụ thể được thể hiện ở Hình 3. Có thể sử dụng các cột và điều kiện sắc ký khác nếu đáp ứng được các tiêu chí kiểm soát chất lượng.

8.2. Phép thử thực hiện GC/MS

Vào đầu buổi tiến hành phân tích, kiểm tra hệ thống GC/MS bằng cách thực hiện phép thử với BFB trước các mẫu bất kỳ, các mẫu thử trắng hoặc các dung dịch tiêu chuẩn được phân tích. Thực hiện các phép thử theo các thông số thiết bị sau:

Năng lượng ion hóa: 70 eV (danh định)

Dải khối lượng: 35 amu đến 300 amu

Thời gian quét: ít nhất 5 lần quét/pic nhưng không nhanh hơn 2 giây/ lần quét

Bơm 25 ng BFB trực tiếp vào cột GC. Nếu bơm trực tiếp không dễ thực hiện, thêm 1 ml dung dịch BFB 25 mg/ml vào 25 ml nước thuốc thử trong xylanh được sử dụng để chuyển mẫu sang thiết bị sục và phân tích mẫu. Nhận được phổ khối đã hiệu chỉnh nền của BFB và xác nhận rằng tất cả các tiêu chí m/z chính ở Bảng 1 đều đạt được. Nếu tất cả các tiêu chí không đạt được, thực hiện lại phép thử cho đến khi đạt được tất cả các tiêu chí.

...

...

...

Hình 3 – Sắc đồ GC/MS

(Cột: J&W DB-624, dài 30 m, đường kính trong 0,25 mm, màng 1,4 ; chương trình nhiệt độ: 35 ^oC trong 4 min: 4^oC/min; 50 ^oC, 0 min; 10 ^oC/min; 175 ^oC, 4 min)

Bảng 2 – Ion định lượng cơ bản, thời gian lưu và giới hạn phát hiện phương pháp

Chất phân tích

Thời gian lưu
min

MDL
 

m/z cơ bản

Diclororociflorometan

1,49

...

...

...

85

Clorometan

1,71

0,150

50

Vinyl clorua

1,79

0,120

62

...

...

...

2,16

0,220

94

Cloroetan

2,28

0,230

64

Tricloflorometan

2,57

...

...

...

101

1,1-Dicloroetan

3,22

0,130

96

1,1,2-Tricloro-1,2,2-trifloroetan

3,25

0,065

101

...

...

...

3,96

0,099

49

trans-1,2-Dicloroeten

4,40

0,200

96

Metyl 1-butyl ete

4,45

...

...

...

73

1,1-Dicloroetetan

5,14

0,047

63

c/s-1,2-Dicloroeten

6,30

0,130

96

...

...

...

6,24

0,041

77

Bromoclorometan

6,77

0,032

128

Cloroform

7,00

...

...

...

83

1,1,1-Tricloroetan

7,24

0,043

97

1,1-Dicloropropen

7,67

0,040

75

...

...

...

7,65

0,042

117

Benzen

8,07

0,036

78

1,2-Dicloroetan

8,14

...

...

...

62

Tricloroeten

9,44

0,045

95

1,2-Dicloropropan

9,85

0,053

63

...

...

...

10,07

0,035

93

Bromodiclorometan

10,47

0,112

83

cis-1,3-Dicloropren

11,29

...

...

...

75

Toluen

11,81

0,047

91

trans-1,3-Dicloropren

12,27

0,051

75

...

...

...

12,56

0,043

83

1,3-Dicloropropan

12,83

0,090

76

Tetracloroeten

12,77

...

...

...

166

Dibromocloroetan

13,24

0,133

129

1,2-Dibromoetan

13,25

0,133

107

...

...

...

14,21

0,052

112

1,1,1,2-Tetracloroetan

14,37

0,048

131

Etylbenzen

14,42

...

...

...

91

m,p-Xylen

14,63

0,038

91

o-Xylen

16,27

0,038

91

...

...

...

15,30

0,031

104

Bromofoc

15,60

0,131

173

Isopropylbenzen

15,90

...

...

...

105

Bromobenzen

16,34

0,140

156

1,1,2,2-Tetracloroetan

16,41

0,066

83

...

...

...

16,44

0,072

75

n-Propylbenzen

16,57

0,260

91

2-Clorotoluen

16,68

...

...

...

126

4-Clorotoluen

16,86

0,040

126

1,3,5-Trimetylbenzen

16,88

0,035

105

...

...

...

17,38

0,100

119

sec-Butylbenzen

17,46

0,025

105

1,2,4-Trimetylbenzen

17,74

...

...

...

105

4-isopropyltoluen

17,99

0,037

119

1,3-Diclorobenzen

17,89

0,045

146

...

...

...

18,04

0,033

146

1,2-Diclorobenzen

18,64

0,031

146

n-Butylbenzen

18,65

...

...

...

91

Hexaclorobutadien

21,69

0,033

225

1,2,4-Triclorobenzen

21,34

0,043

180

...

...

...

21,80

0,049

128

1,2,3-Triclorobenzen

22,32

0,047

180

8.3. Hiệu chuẩn, hiệu chuẩn hệ thống như sau:

8.3.1. Thiết lập hệ thống – trước tiên ổn định bẫy lọc qua đêm ở 180 ^oC bằng cách phun rửa với khí trơ ở tốc độ 20 ml/min. Hàng ngày ổn định bẫy trong 10 min theo nhiệt độ yêu cầu của nhà sản xuất. Nối hệ thống sục và bẫy với GC sử dụng chương trình nhiệt độ đã khuyến nghị và các điều kiện tốc độ dòng. Hiệu chuẩn hệ thống theo phương pháp nội chuẩn hoặc ngoại chuẩn.

...

...

...

RF =

Trong đó:

A_s – là giá trị diện tích pic của hợp chất được đo;

A_is – là giá trị diện tích pic của dung dịch nội chuẩn;

C_is – là nồng độ của dung dịch nội chuẩn;

C_s - là nồng độ của hợp chất được đo

Giá trị trung bình của RF có thể được sử dụng nếu độ lệch chuẩn tương đối RSD nhỏ hơn 20 %.

8.3.3. Hiệu chuẩn theo phương pháp ngoại chuẩn – chuẩn bị các dung dịch tiêu chuẩn như trong 7.10. Phân tích từng dung dịch hiệu chuẩn và lập bảng diện tích pic ứng với nồng độ. Chuẩn bị đường chuẩn đối với từng hợp chất. Nếu tỷ lệ của giá trị diện tích pic với nồng độ (hệ số hiệu chuẩn) là một hằng số trên toàn dải làm việc (< 20 % RSD), có thể giả thiết đường thẳng của góc và sử dụng hệ số hiệu chuẩn trung bình thay cho đường chuẩn.

8.3.4. Kiểm tra hiệu chuẩn

...

...

...

8.4. Phân tích mẫu

Để mẫu đến nhiệt độ phòng. Tháo pittông của xylanh dung tích 25 ml và đóng van lại. Mở chai mẫu và rót cẩn thận mẫu vào ống xylanh để tránh bị tràn. Thay pittông xylanh, xoay ngược xylanh và mở van. Cho không khí thoát ra ngoài và điều chỉnh thể tích mẫu tới 25.0 ml, nhân đôi nếu có đủ mẫu (nắp mẫu đã được loại bỏ, mẫu không thể được lưu giữ do có khoảng không). Thêm một lượng thích hợp dung dịch thay thế/nội chuẩn qua miệng van và đóng van. Lắp vào thiết bị sục, mở van và bơm mẫu vào bồn sục. Đóng van và sục mẫu trong 11 min ở nhiệt độ phòng với tốc độ dòng 40 ml/min (heli hoặc nitơ). Nếu hơi nước gây ra ảnh hưởng đối với khối phổ kế, sử dụng sục khô 3 min và/hoặc mô đun kiểm soát độ ẩm.

Giải hấp các chất bị bẫy ở trên đầu của cột sắc ký ở 180 ^oC trong 4 min trong khi phun rửa bẫy bằng khí trơ ở tốc độ dòng tương thích với cột lựa chọn và bắt đầu chương trình nhiệt độ GC

Cài đặt hệ thống tự xả để khoang sục trống rỗng trong khi bẫy đang được giải hấp trong GC hoặc cách khác sử dụng xylanh mẫu để hút hết không khí trong bình. Rửa khoang bằng hai lần 25 ml nước thuốc thử nếu các mẫu bị nhiễm bẩn cao đang được phân tích. Đảm bảo tất cả các vùng bị ướt trong lúc sục cũng phải ướt trong lúc rửa để tối đa việc rửa.

Ổn định lại bẫy bằng cách sấy ở nhiệt độ ổn định từ 5 min đến 7 min. Để bẫy nguội đến nhiệt độ môi trường trước khi tiến hành mẫu tiếp theo trong bồn sục. Khi tất cả các hợp chất mẫu đã được rửa giải từ cột sắc ký, kết thúc việc thu thập dữ liệu và lưu trữ dữ liệu trong file. Sử dụng phần mềm hệ thống dữ liệu để thể hiện dải phổ khối và profile ion chiết thích hợp (EICP). Nếu độ phân bố ion bất kỳ vượt quá dải làm việc của hệ thống, pha loãng mẫu trong xylanh thứ hai bằng nước thuốc thử và phân tích.

CHÚ THÍCH: Cẩn thận với mẫu vi các hợp chất dễ bay hơi và có thể bị thất thoát nếu mẫu bị mở lại.

Ước tính lượng pha loãng cần thiết và loại bỏ mẫu thừa từ xylanh thứ hai, bơm phần đó vào bồn sục và bằng xylanh thứ hai, thêm lượng nước thuốc thử cần thiết để đạt được tổng 25 ml trong bồn sục.

9. Biểu thị kết quả

Khi các hợp chất đã được xác định, định lượng cơ sở trên dải phân bố nguyên từ EICP của các đặc tính cơ bản m/z được cho trong Bảng 2. Nếu mẫu sinh ra cản trở đối với m/z cơ bản, tính toán hệ số hiệu chỉnh hoặc đường chuẩn sử dụng đặc tính thứ cấp m/z, và sử dụng m/z thứ cấp để định lượng. Báo cáo kết quả bằng . Báo cáo tất cả dữ liệu kiểm soát chất lượng bằng các kết quả mẫu.

...

...

...

Dữ liệu độ chụm và độ chệch điển hình của một phòng thử nghiệm được thể hiện trong Bảng 3.

Bảng 3 –Dữ liệu độ chụm và độ chệch của một phòng thử nghiệm trong nước thuốc thử*

Chất phân tích

Phần trăm thu hồi
%

Độ lệch chuẩn

Độ lệch chuẩn tương đối
%

Benzen

107

0,046

...

...

...

Bromobenzen

111

0,034

6

Bromoclorometan

88

0,052

12

Bromodiclorometan

...

...

...

0,036

7

Bromoform

107

0,042

8

Bromometan

89

0,049

...

...

...

n-Butylbenzen

115

0,048

8

sec-Butylbenzen

113

0,043

8

tert-Butylbenzen

...

...

...

0,057

10

Cacbon tetraclorua

119

0,048

8

Clorobenzen

108

0,033

...

...

...

Cloroetan

115

0,073

13

Clorolorm

108

0,043

8

Clorometan

...

...

...

0,036

10

2-Clorotoluen

111

0,045

8

4-Clorotoluen

112

0,049

...

...

...

Dibromocloroetan

108

0,042

8

1,2-Dibromoetan

102

0,042

8

Dibromometan

...

...

...

0,113

17

1,2-Diclorobenzen

106

0,043

8

1,3-Diclorobenzen

108

0,052

...

...

...

1,4-Diclorobenzen

106

0,045

8

Diclored florometan

80

0,058

15

1,1-Dicloroetan

...

...

...

0,049

9

1,2-Dicloroetan

102

0,031

6

1,1-Dicloroeten

99

0,059

...

...

...

cis-1,2-Dicloroeten

103

0,062

12

trans-1,2-Dicloroeten

113

0,045

8

1,2-Dicloropropan

...

...

...

0,064

10

1,3-Dicloropropan

107

0,046

9

2,2-Dicloropropan

106

0,049

...

...

...

1,1-Dicloropropen

110

0,044

8

cis-Dicloropropen

99

0,044

9

trans-1,3-Dicloropropen

...

...

...

0,038

7

Etylbenzen

109

0,049

9

Hexaciorobutadien

112

0,053

...

...

...

Isopropylbenzen

112

0,044

8

4-isopropyltoluen

117

0,046

8

Metylen clorua

...

...

...

0,050

12

Metyl-butyl ete

81

0,017

11

Naphtalen

121

0,068

...

...

...

n-Propylbenzen

107

0,048

9

Styren

101

0,039

8

1,1,1,2-Tetracloroetan

...

...

...

0,037

7

1,1,2,2-Tetracloroetan

104

0,053

10

Tetracloroeten

106

0,046

...

...

...

Toluen

106

0,045

8

1,2,3-Triclorobenzen

118

0,054

9

1,2,4-Triclorobenzen

...

...

...

0,049

9

1,1,1-Tricloroetan

106

0,040

8

1,1,2-Tricloroetan

97

0,041

...

...

...

Tricloroeten

105

0,041

8

Tricloroflorometan

105

0,045

9

1,2,3-Tricloropropan

...

...

...

0,034

6

1,1,2-Tricloro-1,2,2-trifloroetan

113

0,042

7

1,2,4-Trimetylbenzen

116

0,044

...

...

...

1,3,5-Trimetylbenzen

110

0,051

9

Vinyl clorua

85

0,037

9

m,p-Xylen

...

...

...

0,057

10

o-Xylen

106

0,044

8

* Đối với tất cả các chất phân tích, bảy mẫu được phân tích, mỗi mẫu có nồng độ 0,5