Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6846:2007 (ISO 7251:2005) về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phương pháp phát hiện và định lượng Escherichia coli giả định - Kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất

905780

Giáo dục

- {{m.title}}

Thuế

- {{m.title}}

- {{m.title}}

LawNet .vn

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6846:2007 (ISO 7251:2005) về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phương pháp phát hiện và định lượng Escherichia coli giả định - Kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất

Số hiệu:	TCVN6846:2007	Loại văn bản:	Tiêu chuẩn Việt Nam
Nơi ban hành:	***	Người ký:	***
Ngày ban hành:	01/01/2007	Ngày hiệu lực:	Đã biết
Ngày công báo:	Đang cập nhật	Số công báo:	Đang cập nhật
		Tình trạng:	Đã biết

Số hiệu:	TCVN6846:2007
Loại văn bản:	Tiêu chuẩn Việt Nam
Nơi ban hành:	***
Người ký:	***
Ngày ban hành:	01/01/2007
Ngày hiệu lực:	Đã biết
Ngày công báo:	Đang cập nhật
Số công báo:	Đang cập nhật
Tình trạng:	Đã biết

	a) Môi trường nồng độ kép	b) Môi trường nồng độ đơn
Thủy phân mô thực vật và động vật bằng enzym	40,0 g	20,0 g
Lactoza	10,0 g	5,0 g
Dikali monohydro phosphat (K₂HPO₄)	5,5 g	2,75 g
Kali dihidro phosphat (KH₂PO₄)	5,5 g	2,75 g
Natri clorua	10,0 g	5,0 g
Natri lauryl sunfat [CH₃(CH₂)₁₁OSO₃Na]	0,2 g	0,1 g
Nước	1 000 ml	1 000 ml

5.2.2. Chuẩn bị

Hoà tan các thành phần hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trong nước bằng cách đun nóng, nếu cần.

Chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng là 6,8 ± 0,2 ở 25 ^oC, nếu cần.

Phân phối từng lượng 9 ml môi trường này vào các ống nghiệm có kích thước 16 mm x 160 mm (6.4) chứa các ống Durham (6.6) đối với môi trường nồng độ đơn và 10 ml vào các ống thử có kích thước 18 mm x 180 mm hoặc 20 mm x 200 mm (6.4) chứa các ống Durham (6.6) với môi trường nồng độ kép.

Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực (6.1) ở nhiệt độ 121 ^oC.

Các ống Durham không được chứa bọt khí sau khi đã khử trùng.

5.3. Canh thang EC (môi trường chọn lọc)

5.3.1. Thành phần

Dịch thủy phân casein bằng enzym

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.

Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Lactoza

5,0 g

Muối mật (bile salts) số 3^a

1,5 g

Dikali monohydro phosphat (K₂HPO₄)

4,0 g

Kali dihydro phosphat (KH₂PO₄)

1,5 g

Natri clorua

...

Nước

1 000 ml

^a Xem tài liệu tham khảo [1].

5.3.2. Chuẩn bị

Hoà tan các thành phần hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trong nước bằng cách đun nóng, nếu cần.

Chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng là 6,8 ± 0,2 ở 25 ^oC, nếu cần.

Phân phối từng lượng môi trường 10 ml vào các ống có kích thước 16 mm x 160 mm (6.4) chứa các ống Durham (6.6).

Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực (6.1) ở nhiệt độ 121 ^oC.

Các ống Durham không được chứa bọt khí sau khi đã khử trùng.

...

Kiểm tra tính năng của môi trường nuôi cấy, xem ISO/TS 1113-1 và ISO/TS 1113-2.

5.4. Nước pepton, không chứa indol

5.4.1. Thành phần

Dịch thủy phân casein bằng enzym

10,0 g

Natri clorua

5,0 g

Nước

1 000 ml

...

Hoà tan các thành phần hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trong nước bằng cách đun nóng, nếu cần.

Chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng là 7,3 ± 0,2 ở 25 ^oC, nếu cần.

Phân phối từng lượng môi trường từ 5 ml đến 10 ml vào các ống nghiệm có kích thước 16 mm x 160 mm (6.4).

Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực (6.1) ở nhiệt độ 121 ^oC.

5.5. Thuốc thử Indol (Thuốc thử Kovacs)

5.5.1. Thành phần

4-Dimetylaminobenzaldehyd

5,0 g

2-Metyl butan-1-ol hoặc pentan-1-ol

...

Axit clohydric (p₂₀ 1,18 đến 1,19 g/ml)

25,0 ml

5.5.2. Chuẩn bị

Hoà tan 4-Dimetylaminobenzaldehyd trong cồn bằng cách đun nhẹ trong nồi cách thủy, duy trì ở nhiệt độ khoảng từ 50 ^oC đến 55 ^oC.

Làm nguội và thêm axit.

Bảo quản tránh ánh sáng và giữ ở nhiệt độ khoảng 4 ^oC [xem TCVN 6404 (ISO 7218)].

Thuốc thử phải có màu vàng nhạt hoặc nâu nhạt.

CHÚ THÍCH: Có thể sử dụng các loại để đùng ngay có bán sẵn.

6. Thiết bị và dụng cụ thủy tinh

...

Sử dụng các thiết bị, dụng cụ của phòng thử nghiệm phân tích vi sinh thông thường, cụ thể là:

6.1. Thiết bị để khử trùng khô (tủ sấy) hoặc để khử trùng ướt (nồi hấp áp lực)

Xem TCVN 6404 (ISO 7218).

6.2. Tủ ấm, có khả năng hoạt động ở 37 ^oC ± 1 ^oC và 44 ^oC ± 1 ^oC.

6.3. Nồi cách thủy, có khả năng duy trì ở 44 ^oC ± 1 ^oC.

6.4. Các ống nghiệm, có kích thước khoảng 16 mm x 160 mm, 18 mm x 180 mm và 20 mm x 200 mm.

6.5. Que cấy vòng, bằng platin/iridi hoặc niken/crom có đường kính khoảng 3 mm hoặc các vòng lấy mẫu 10 vô trùng sử dụng một lần.

6.6. Các ống Durham, có kích thước thích hợp dùng cho các ống nghiệm (6.4).

6.7. Pipet xả hết, có dung tích danh định 1 ml và 10 ml.

...

7. Lấy mẫu

Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải là mẫu đại diện. Mẫu không bị hư hỏng hoặc biến đổi trong suốt quá trình vận chuyển hoặc bảo quản.

Việc lấy mẫu không qui định trong tiêu chuẩn này. Nếu chưa có tiêu chuẩn cụ thể cho sản phẩm liên quan thì các bên có liên quan nên thoả thuận với nhau về vấn đề này.

8. Chuẩn bị mẫu thử

Chuẩn bị mẫu thử theo tiêu chuẩn cụ thể thích hợp đối với sản phẩm có liên quan. Nếu không có tiêu chuẩn cụ thể thì các bên liên quan nên thoả thuận về vấn đề này.

9. Cách tiến hành

9.1. Phương pháp phát hiện

9.1.1. Phần mẫu thử và huyền phù ban đầu

Xem phần thích hợp của TCVN 6507 (ISO 6887) tùy thuộc vào sản phẩm có liên quan, hoặc TCVN 6404 (ISO 7218).

...

9.1.2. Ủ môi trường tăng sinh chọn lọc (canh thang lauryl sunfat)

Ủ các ống canh thang lauryl sunfat nồng độ đơn hoặc nồng độ kép (5.2) trong tủ ấm (6.2) ở nhiệt độ 37 ^oC trong 24 giờ ± 2 giờ. Nếu ở giai đoạn này không sinh khí cũng như không bị mờ đục làm cản trở việc quan sát sự sinh khí thì ủ tiếp đến 48 giờ ± 2 giờ.

CHÚ THÍCH: Đối với giáp xác và nhuyễn thể, thì thời gian ủ có thể đến 48 giờ ± 2 giờ.

Đối với một số sản phẩm sữa (ví dụ như casein), thì ống Durham có thể bị dính vào đáy của ống môi trường tăng sinh chọn lọc. Nếu sau thời gian ủ 48 giờ thấy mờ đục nhưng không sinh khí thì cấy tiếp vào canh thang EC và tiến hành theo phương pháp mô tả trong 9.1.3.

9.1.3. Cấy và ủ môi trường chọn lọc (canh thang EC)

Sau khi ủ môi trường nồng độ kép [5.2.1 a)] theo 9.1.2, nếu quan sát thấy mờ đục hoặc sinh khí, hoặc sau khi ủ môi trường nồng độ đơn [5.2.1 b)] theo 9.1.2 nếu quan sát thấy sinh khí, thì cấy một vòng (6.5) dịch cấy này vào canh thang EC (5.3) và ủ trên nồi cách thủy (6.3) hoặc đặt trong tủ ấm (6.2) ở 44 ^oC trong 24 giờ ± 2 giờ. Nếu ở giai đoạn này không thấy sinh khí trong canh thang EC (5.3), thì kéo dài thời gian ủ sao cho tổng thời gian ủ là 48 giờ ± 2 giờ.

CHÚ THÍCH: Đối với giáp xác và nhuyễn thể, thì tổng thời gian ủ không quá 24 giờ ± 2 giờ.

9.1.4. Cấy và ủ môi trường nước pepton

Sau khi đã ủ theo 9.1.3, nếu quan sát thấy sinh khí, cấy vào nước pepton (5.4), đã được làm ấm trước đến 44 ^oC một vòng (6.5) dịch cấy. Ủ 48 giờ ± 2 giờ ở 44 ^oC.

...

Thêm 0,5 ml thuốc thử indol (5.5) vào các ống chứa nước pepton (5.4) đã được ủ theo 9.1.4.

Trộn kỹ và kiểm tra sau 1 phút. Nếu trong pha cồn có màu đỏ chứng tỏ có indol.

9.1.6. Diễn giải

Môi trường tăng sinh chọn lọc được cấy theo 9.1.2 mà cho thấy (sau khi cấy truyền và ủ theo 9.1.3 và 9.1.4) có sự sinh khí trong ống nghiệm đựng canh thang EC và sinh indol trong ống nước pepton thì được coi là dương tính.

9.2. Phương pháp định lượng

9.2.1. Phần mẫu thử, huyền phù ban đầu và các dung dịch pha loãng

Xem phần thích hợp của TCVN 6507 (ISO 6887) tùy thuộc vào sản phẩm có liên quan, hoặc TCVN 6404 (ISO 7218).

Chuẩn bị đủ số lượng các dung dịch pha loãng để đảm bảo rằng tất cả các ống của độ pha loãng cuối cùng sẽ cho kết quả âm tính.

9.2.2. Cấy và ủ môi trường tăng sinh chọn lọc (canh thang lauryl sunfat)

...

9.2.2.2. Lấy ba ống nghiệm môi trường tăng sinh chọn lọc nồng độ kép [5.2.1a)]. Dùng pipet vô trùng (6.7) chuyển vào mỗi ống nghiệm 10 ml huyền phù ban đầu. Các phần thử nghiệm này tương ứng với 1 g mẫu thử trên một ống.

9.2.2.3. Lấy ba ống nghiệm môi trường tăng sinh chọn lọc nồng độ đơn [5.2.1b)]. Dùng pipet mới vô trùng (6.7) chuyển vào mỗi ống nghiệm 1 ml huyền phù ban đầu. Các phần thử nghiệm này tương ứng với 0,1 g mẫu trên một ống.

9.2.2.4. Đối với mỗi độ pha loãng tiếp theo (bằng 0,01 g, 0,001 g, v.v...mẫu thử trên một ống), thì tiến hành tiếp theo 9.2.2.3. Sử dụng mỗi pipet vô trùng mới cho một độ pha loãng. Trộn cẩn thận dịch cấy và môi trường.

9.2.2.5. Ủ các ống nghiệm môi trường tăng sinh chọn lọc nồng độ kép đã được cấy theo 9.2.2.2 và các ống nghiệm môi trường tăng sinh chọn lọc nồng độ đơn đã được cấy theo 9.2.2.3 và 9.2.2.4 trong tủ ấm (6.2) ở 37 ^oC trong 24 giờ ± 2 giờ. Nếu trong giai đoạn này không sinh khí cũng không bị mờ đục thì ủ tiếp đến 48 giờ ± 2 giờ.

Đối với giáp xác và nhuyễn thể, thì thời gian ủ có thể đến 48 giờ ± 2 giờ.

Đối với một số sản phẩm sữa (ví dụ như casein), thì ống Durham có thể bị dính vào đáy của ống môi trường tăng sinh chọn lọc. Nếu sau thời gian ủ 43 giờ thấy mờ đục nhưng không sinh khí thì cấy tiếp vào canh thang EC (5.3) và tiến hành theo phương pháp như mô tả trong 9.2.3.

9.2.3. Cấy truyền và ủ môi trường chọn lọc (canh thang EC)

9.2.3.1. Đối với mỗi ống nghiệm đựng môi trường nồng độ kép được ủ theo 9.2.2.5 thấy mờ đục hoặc sinh khí, và đối với mỗi ống nghiệm đựng môi trường nồng độ đơn được ủ theo 9.2.2.5 cho thấy sinh khí thì cấy truyền một vòng cấy (6.5) sang ống nghiệm đựng canh thang EC (5.3).

9.2.3.2. Ủ các ống đã được cấy theo 9.2.3.1 trong nồi cách thủy (6.3) hoặc để trong tủ ấm (6.2) ở 44 ^oC trong 24 giờ ± 2 giờ. Nếu ở giai đoạn này không thấy sinh khí trong canh thang EC (5.3), thì kéo dài thời gian ủ sao cho tổng thời gian ủ là 48 giờ ± 2 giờ.

...

9.2.4. Cấy và ủ môi trường nước pepton

Sau khi đã ủ theo 9.2.3.2, nếu quan sát thấy sinh khí, thì cấy vào ống nghiệm đựng nước pepton (5.4), đã được làm ấm trước đến 44 ^oC một vòng (6.5) dịch cấy. Ủ 48 giờ ± 2 giờ ở 44 ^oC.

9.2.5. Kiểm tra về sự sinh indol

Thêm 0,5 ml thuốc thử indol (5.5) vào các ống chứa nước pepton (5.4) đã được ủ theo 9.2.4.

Trộn kỹ và kiểm tra sau 1 phút. Nếu trong pha cồn có màu đỏ chứng tỏ có mặt indol.

9.2.6. Diễn giải

Các ống đựng môi trường tăng sinh chọn lọc nồng độ đơn [5.2.1.b)] hoặc môi trường tăng sinh chọn lọc nồng độ kép [5.2.1.a)] được ủ theo 9.2.2 cho thấy (sau khi cấy truyền và ủ theo 9.2.3 và 9.2.4) có sự sinh khí trong ống đựng canh thang EC và sinh indol trong ống nước pepton thì được coi là dương tính.

Đối với mỗi độ pha loãng, đếm số lượng ống dương tính của môi trường tăng sinh chọn lọc nồng độ đơn [5.2.1 .b)] và môi trường tăng sinh chọn lọc nồng độ kép [5.2.1.a)].

10. Biểu thị kết quả

...

Theo diễn giải các kết quả (9.1.6), báo cáo sự có mặt hay không có mặt E.coli giả định trong phần mẫu thử được tính theo khối lượng bằng gam hoặc theo thể tích bằng mililit.

10.2. Phương pháp định lượng

Xem Phụ lục A.

VÍ DỤ: Sử dụng mẫu dạng rắn và ba ống, trong 95 % các trường hợp, giới hạn tin cậy biến động từ 13 E.coli giả định đến 200 E.coli giả định trên gam đối với MPN 7,4 x 10 E.coli giả định trên gam, và từ 4 E.coli giả định đến 99 E.coli giả định trên gam đối với MPN 2,4 x 10 E.coli giả định trên gam.

11. Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải chỉ rõ:

a) mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử.

b) phương pháp lấy mẫu đã sử dụng, nếu biết;

c) phương pháp thử nghiệm đã dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này;

...

e) kết quả thử nghiệm thu được.

Phụ lục A

(qui định)

Bảng MPN

A.1. Tính MPN sử dụng ba ống nghiệm

Xem TCVN 6404 (ISO 7218).

A.2. Tính MPN sử dụng năm ống nghiệm

Xem bảng A.1.

...

Số kết quả dương tính

Chỉ số MPN

Cấp hạng ^a khi số lượng mẫu (đối với lô) được thử nghiệm là

Giới hạn tin cậy

...

≥ 95%

≥ 99%

<0,18

...

0,00

0,65

0,00

0,93

...

0,00

0,65

0,00

0,93

...

0,18

0,01

...

0,00

0,93

0,36

...

0,07

0,99

0,02

1,40

0,37

...

0,07

0,99

0,02

1,40

...

0,55

0,17

1,40

...

2,10

0,56

...

0,17

1,40

0,09

2,10

0,20

...

0,02

0,99

0,01

1,40

...

0,40

0,07

1,00

0,02

...

0,60

...

1,40

0,09

2,10

0,40

...

0,07

1,10

0,03

1,40

...

0,17

1,40

0,09

2,10

...

0,81

0,33

...

0,20

2,80

0,61

...

0,18

1,40

0,09

2,10

0,82

...

0,33

2,20

0,20

2,80

...

0,83

0,33

2,20

...

2,80

1,0

...

0,3

2,2

0,2

2,8

1,1

...

0,3

2,2

0,2

2,8

...

0,45

0,08

1,4

0,04

...

0,63

...

1,50

0,09

2,10

0,91

...

0,33

2,20

0,20

2,80

...

0,19

1,70

0,10

2,30

...

0,92

0,33

...

0,20

2,80

1,2

...

0,4

2,5

0,2

3,4

0,93

...

0,34

2,20

0,20

2,80

...

1,2

0,4

2,5

...

3,4

1,4

...

0,6

3,4

0,4

4,4

1,2

...

0,4

2,5

0,2

3,4

...

1,4

0,6

3,4

0,4

...

1,5

...

3,4

0,4

4,4

0,78

...

0,21

2,20

0,12

2,80

...

0,4

2,2

0,2

2,9

...

1,3

0,6

...

0,4

4,4

1,1

...

0,4

2,5

0,2

3,4

1,4

...

0,6

3,4

0,4

4,4

...

1,7

0,6

3,4

...

4,4

1,4

...

0,6

3,4

0,4

4,4

1,7

...

0,7

3,9

0,5

5,1

...

2,0

0,7

3,9

0,5

...

1,7

...

3,9

0,5

5,2

2,1

...

0,7

3,9

0,5

5,2

...

1,0

6,6

0,7

9,4

...

2,1

0,7

...

0,5

5,2

2,4

...

1,0

6,6

0,7

9,4

2,5

...

1,0

6,6

0,7

9,4

...

1,3

0,4

3,4

...

4,4

1,7

...

0,5

3,4

0,4

4,4

2,1

...

0,7

3,9

0,5

5,2

...

2,5

1,0

6,6

0,7

...

1,7

...

3,9

0,4

5,1

2,1

...

0,7

4,1

0,5

5,3

...

1,0

6,6

0,7

9,4

...

3,1

1,0

...

0,7

9,4

2,2

...

0,7

4,8

0,5

6,1

2,6

...

1,0

6,6

0,7

9,4

...

3,2

1,0

6,6

...

9,4

3,8

...

1,3

10,0

0,9

14,7

2,7

...

1,0

6,6

0,7

9,4

...

3,3

1,0

6,6

0,7

...

3,9

...

10,0

0,9

14,7

3,4

...

1,3

10,0

0,9

14,7

...

1,3

10,0

0,9

14,7

...

4,7

1,4

...

0,9

14,7

4,1

...

1,3

10,0

0,9

14,7

4,8

...

1,4

11,3

0,9

14,7

...

2,3

0,7

6,6

...

9,4

3,1

...

1,0

6,6

0,7

9,4

4,3

...

0,3

10,0

0,9

14,7

...

5,8

2,1

14,9

1,4

...

3,3

...

10,0

0,7

14,7

4,6

...

1,4

11,3

0,9

14,7

...

2,1

14,9

1,4

20,0

...

8,4

3,4

...

2,1

27,0

4,9

...

1,5

14,9

0,9

20,0

7,0

...

2,2

16,8

1,4

23,0

...

9,4

3,4

22,0

...

28,0

...

7,9

2,3

22,0

1,5

...

106

...

106

150

...

166

223

...

338

160

...

460

620

> 160

...

CHÚ THÍCH: Các kết quả này được dựa trên Tài liệu tham khảo [2]

...

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] Microbiology in foods, 1988, Vol.1, p.280, University of Toronto Press; Toronto, Canada.

[2] DE MAN, J.C. MPN tables, corrected. Eur. J. Appl. Biotechnol., 1983, 17. pp. 301-305.

{{m.Name}} {{m.Name}}

Văn bản gốc
(Không có nội dung)

Bạn Chưa Đăng Nhập Tài khoản!

Vì chưa Đăng Nhập nên Bạn chỉ xem được Thuộc tính của Văn bản. Bạn chưa xem được Hiệu lực của Văn bản, Văn bản Liên quan, Văn bản thay thế, Văn bản gốc, Văn bản tiếng Anh,...

Nếu chưa có Tài khoản, mời Bạn Đăng ký Tài khoản tại đây

Văn bản tiếng Anh
(Không có nội dung)

LawNet .vn

Không có nội dung

Ban hành: {{m.News_Dates_Date}}

Hiệu lực: {{m.News_EffectDate_Date}}

Tình trạng: {{m.TinhTrang}}

Cập nhật: {{m.Email_SendDate_Date}}

Ban hành: {{m.News_Dates_Date}}

Hiệu lực: {{m.News_EffectDate_Date}}

Tình trạng: {{m.TinhTrang}}

Cập nhật: {{m.Email_SendDate_Date}}

LawNet .vn

Không có nội dung

Ban hành: {{m.News_Dates_Date}}

Hiệu lực: {{m.News_EffectDate_Date}}

Tình trạng: {{m.TinhTrang}}

Cập nhật: {{m.Email_SendDate_Date}}

Ban hành: {{m.News_Dates_Date}}

Hiệu lực: {{m.News_EffectDate_Date}}

Tình trạng: {{m.TinhTrang}}

Cập nhật: {{m.Email_SendDate_Date}}

LawNet .vn

{{m.Name}} {{m.Name}}

Tra cứu nhanh

Từ khóa

{{m}},

Địa chỉ:	19 Nguyễn Gia Thiều, Phường Võ Thị Sáu, Quận 3, TP Hồ Chí Minh
Điện thoại:	(028) 7302 2286 (6 lines)
E-mail:	info@lawnet.vn