Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 549:2002 về quy trình kiểm dịch nhập khẩu cây có múi do Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn ban hành
Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 549:2002 về quy trình kiểm dịch nhập khẩu cây có múi do Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn ban hành
Số hiệu: | 10TCN549:2002 | Loại văn bản: | Tiêu chuẩn ngành |
Nơi ban hành: | Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn | Người ký: | *** |
Ngày ban hành: | 06/12/2002 | Ngày hiệu lực: | Đã biết |
Ngày công báo: | Đang cập nhật | Số công báo: | Đang cập nhật |
Tình trạng: | Đã biết |
Số hiệu: | 10TCN549:2002 |
Loại văn bản: | Tiêu chuẩn ngành |
Nơi ban hành: | Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn |
Người ký: | *** |
Ngày ban hành: | 06/12/2002 |
Ngày hiệu lực: | Đã biết |
Ngày công báo: | Đang cập nhật |
Số công báo: | Đang cập nhật |
Tình trạng: | Đã biết |
1. Kiểm tra Kiểm dịch Sau nhập khẩu. Bảng 1. Các phương pháp kiểm tra. |
||
Phản ứng chuỗi Polymerasa |
Sử dụng chẩn đoán một số loại bệnh ẩn. |
|
Men liên kết miễn dịch |
Virus tàn lụi cam quýt (Citrus tristeza closterovirus) |
|
|
Xylella fastidiosa |
|
|
Spiroplasma citri |
|
|
Virus lùn Satsuma (Satsuma dwarf ilarvirus) |
|
|
Virus nhỏ lá cam quýt (Citrus tatter leaf capillovirus) |
|
Chỉ thị sinh học |
|
|
Các loài |
Các giống cây chỉ thị |
|
Citrus sinensis |
Cam |
Tổ hợp Virus bệnh đốm (Psorosis complex) |
|
|
Spiroplasma citri |
|
|
Liberobacter asiaticum |
|
|
Liberobacter africanum |
Citrus limon |
Chanh Eureka |
Virus tàn lụi cam quýt (Citrus tristeza closterovirus) |
|
|
Virus quăn lá cam quýt (Citrus leaf rugose virus) |
|
|
Virus khảm lá (Citrus variegation ilarvirus) |
Citrus medica L. |
Chanh Yên |
Viroid vẩy vỏ (Citrus exocortis viroid) |
Citrus aurantifolia |
Chanh Tây ấn |
Virus tàn lụi cam quýt (Citrus tristeza closterovirus) |
|
|
Virus biến dạng gân lá (Citrus veinenation virus) |
Poncirus trifoliata X C. sinensis |
Chanh ba lá hoặc quất Swingle |
Bệnh nhỏ lá cam quýt (Citrus tatter leaf capillovirus) |
1.1. Phương pháp PCR.
Mỗi loài sinh vật có cấu trúc DNA khác nhau và trong cùng một giống giữa các loài cũng có sự khác nhau. Trong một giống, DNA của các loài có những đoạn cấu trúc giống nhau, nhưng có những đoạn có cấu trúc khác nhau mà cấu trúc này đặc trưng cho loài này mà những loài khác không có. Đây là cơ sở di truyền để phân biệt giữa loài này và loài khác. Phương pháp PCR chính là nhằm nhân lên gấp bội số lượng các đoạn DNA đặc trưng để từ đó có thể chẩn đoán chính xác được các loài.
1.2. Phương pháp ELISA.
Kỹ thuật này cơ bản được dựa trên sự kết hợp giữa men với các kháng thể hoặc kháng nguyên thành vật đánh dấu men sau đó chúng lại có phản ứng với kháng nguyên hoặc kháng thể tương ứng thành hợp chất miễn dịch của men đánh dấu. Men kết hợp tại hợp chất miễn dịch khi gặp chất đệm sẽ thúc đẩy phản ứng thuỷ phân chất đệm tạo ra màu vàng. Tốc độ của phản ứng thuỷ phân càng nhanh, màu vàng càng rõ, chứng tỏ men càng nhiều, điều này cũng chứng tỏ nồng độ của kháng nguyên càng cao. Do tính đặc hiệu của phản ứng ELISA ta có thể xác định được đặc tính của kháng nguyên.
Bộ Kit để kiểm tra có thể sử dụng cho các bệnh sau:
- Xylella fastidiosa
- Spiroplasma citri
- Lùn Satsuma (Satsuma dwarf ilarvirus)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- Virus nhỏ lá cây có múi (Citrus tatter leaf cappillovirus)
1.3 Chỉ thị sinh học
Dùng cây chỉ thị để xác định những bệnh ẩn của cây có múi ở hai mức nhiệt độ:
* Nhiệt độ 18 - 25oC (tốt nhất là 20 - 22 oC) cho các tác nhân gây bệnh sau:
- Virus tàn lụi cây có múi (Viruses Citrus tristeza closterovirus)
- Virus biến dạng gân lá cây có múi (Citrus veinenation virus)
- Virus khảm lá (Citrus varegation ilarvirus)
- Vius quăn lá cây có múi (Citrus leaf rugose virus)
- Virus bé lá cây có múi (Citrus tatter leaf capillovirus)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- Viroid vảy vỏ cây có múi (citrus exocortis viroid)
- Viroid mạch dẫn cây có múi (citrus cachexia viroid)
- Spiroplasma citri
- Liberobacter asiaticum
- Liberobacter africanum
Bảng 1.3.1 Số cây chỉ thị cần nhân giống.
Dải nhiệt độ
Cây chỉ thị
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Số cây trong chậu
Lạnh 18-25oC
Cam ngọt
3
5
Chanh Eureka
2
5
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Chanh Tây ấn
2
5
Chanh Rusk
2
5
Nóng 25-35oC
Cam ngọt
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
5
Chanh yên
2
2
Bảng 1.3.2. Cây chỉ thị dùng cho việc kiểm tra bệnh.
Bệnh
Cây chỉ thị thích hợp
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Cachexia (Xyloporosis)
Chanh yên
- Chanh sần
- Poncirus trifoliata
Virus quăn lá (Citrus leaf rugose)
Chanh Tây ấn
- Citrus limon
- Bưởi đỏ Duncan
Virus khảm lá (Citrus variegation)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Đậu tương và đậu đen
Giòn lá (Crinkly leaf)
Chanh Eureka
-
Cristacortis
Cam ngọt
- Quýt Orlando
- Cam chua
Vảy vỏ (Exocortis)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Chanh sần
Greening and Dieback
Cam ngọt
- Quýt Sexton
- Bưởi Duncan
Impietratura
Cam ngọt
Bưởi
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Cam ngọt
- Quýt Homosassa, Emperor
- Chanh Tây ấn
Đốm vòng dòngB (Ringspot (Psorosis B ))
Cam ngọt
-
Lùn Satsuma (Satsuma dwarf)
- Quýt Satsuma
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Stubborn
Cam ngọt
- Quất Sexton
- Bưởi Duncan
Nhỏ lá/Lùn cây (Tatter leaf/ stunt)
Chanh ba lá và quất Swingle
- Chanh Troyer
- Đậu đen (Vigna cilindrica)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- Nicotiana clevelandii
Hai chủng tàn lụi cam quýt (Tristeza - stem pitting and seedling yellows)
Chanh Tây ấn
Chanh Eureka
Chanh Mexica
- Cam đắng ngọt Seville
- Cam chua (Citrus aurantium)
Biến dạng gân/U thân gỗ (Vein enation/ woody Gall)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Chanh sần
Bảng 1.3.3. Triệu chứng bệnh trên cây chỉ thị
Dải nhiệt độ
Bệnh
Cam ngọt
Chanh Eureka
Chanh Tây ấn
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Chanh yên
Quăn lá
(Citrus leaf rugose)
CF
LP
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Biến dạng gân lá
(Citrus variegation)
AS
Giòn lá (Crinkly leaf)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
AS
LP
Cristacortis
OL
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Impietratura
OL
Lạnh
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
(Psorosis A)
CF
Đốm lá dòng B
(Psorosis B)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Nhỏ lá/lùn (Tatter leaf / stunt)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Đốm tàn lụi (Tristeza – stempitting)
CVF&WP
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
LY & S
Biến dạng/u thân gỗ (Veinenation / woody gall)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Exocortis
LE
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Greening and dieback
VY & LM
Stubborn
CM
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
AS - Asteroid spots (đốm dạng sao) CF - Chlorotic flecks (đốm vàng)
CM - Chlorotic mottling (đốm mất màu) CVF - Chlorotic vein flecking (đốm màu vàng gân)
LE - Leaf epinasty LM - Leaf mottle (đốm lá)
LP - Leaf puckering (nhăn lá) LY - Leaf yellowing (vàng lá)
OL - Oak leaf pattern (dải sùi lá) S - Stunting (lùn cây)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
WP - Wood pitting (Đốm thân gỗ)
2. Nhân giống, chăm sóc và bảo quản tại cơ sở Sau nhập khẩu.
2.1. Nhân gốc ghép và cây chỉ thị.
Các hạt được gieo để làm cây chỉ thị sinh học hoặc gốc ghép được lấy từ các cơ sở sạch bệnh có uy tín, các hạt này đem gieo trong khay và để ở nhiệt độ 20 - 25oC. Cây chỉ thị là chanh yên (Citrus medica L.) được nhân giống từ cành ở nhiệt độ 30 - 35oC. Cây được trồng trong hỗn hợp chất độn (của Trường Đại học California) theo tỷ lệ thể tích phù hợp gồm: 1 than bùn : 1 cát hoặc bột đá và phân vô cơ được tiệt trùng theo phương pháp Paster (ở 60oC trong 30 phút) có thể thêm vào nhiều nhất 10% vỏ trấu (tính theo thể tích).
Trước khi sử dụng làm cây chỉ thị hoặc gốc ghép không bón thúc cho cây. Sau đó chuyển chúng vào chậu hoặc túi nilon có chứa 250 – 300g hỗn hợp chất nền theo công thức của Trường Đại học California. Nếu cây biểu hiện triệu chứng thiếu dinh dưỡng thì sẽ bón bổ sung bằng hỗn hợp chất độn với tỷ lệ 1 máu khô và bột xương: 1 Dolomit. Sau đưa cây được ghép trồng trong điều kiện nhiệt độ 30 - 35oC.
2.2. Nhân giống từ mắt ghép.
Hai cây được nhân giống từ mắt ghép trên gốc chanh Sần. Ba đến bốn tuần sau khi ghép mắt, cắt các chồi nách của chanh sần để tập trung cho mắt ghép phát triển.
Chọn một cây làm cây chỉ thị. Nếu cần thì tiến hành ghép đỉnh sinh trưởng. Cây con được nhân lên từ cây chỉ thị sẽ được trả lại cho chủ hàng.
2.3. Phòng trừ dịch hại.
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3. Loại bỏ các tác nhân gây bệnh và nhân giống.
Ghép đỉnh sinh trưởng là kỹ thuật nhân dòng các giống cây có múi đã được loại bỏ bệnh, cùng với khả năng tạo ra những dòng mới sạch Virus và các tác nhân gây bệnh khác. Tất cả cây có múi mới phải được ghép đỉnh sinh trưởng ít nhất một lần trước khi xuất ra khỏi cơ sở Kiểm dịch Sau nhập khẩu. Điều này có nghĩa là đảm bảo sạch Xanthomonas campestris pv. citrumelo, phytoplasma, Viroid và Virus. Các bước kiểm tra được làm nhiều lần đến khi cho kết quả kiểm tra khẳng định là sạch bệnh. Những gốc ghép được sản xuất từ các tổ chức trên thế giới có chứng nhận đạt tiêu chuẩn thì không cần phải ghép lại ở Việt Nam.
3.1. Mắt ghép dùng ghép đỉnh sinh trưởng.
Việc ghép đỉnh sinh trưởng được thực hiện ngay lập tức khi có mắt ghép thích hợp được đưa tới.
Nếu có chồi ghép mới nhập không thích hợp cho việc ghép ban đầu các mắt ghép được ghép vào thân một cây mẹ và sau đó chọn mắt ghép và thời điểm thích hợp nhất để tiến hành ghép.
3.2. Xử lý mắt ghép để ghép đỉnh sinh trưởng.
Tiệt trùng bề mặt mắt ghép trước khi bắt đầu ghép. Nhúng mắt ghép trong dung dịch Ethanol 70 % trong 2 phút, sau đó nhúng trong dung dịch Clorin (Clo) 0,2% hoặc Sodium hypochrorite trong 10 phút. Bảo quản mắt ghép ở nhiệt độ 26oC trong cát ẩm đã tiệt trùng với chu kỳ chiếu sáng 16 giờ đến khi đem ra sử dụng.
3.3. Sản xuất gốc ghép để ghép đỉnh sinh trưởng.
Sử dụng chanh ba lá, chanh sần và bưởi Citrus grandis (Chỉ dùng cho các giống bưởi Pomelo) làm gốc ghép.
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Nếu hạt không dùng ngay sau khi đã tách khỏi quả, ta phơi trên giá đỡ. Hạt được tiệt trùng bề mặt và được bảo quản bằng cách nhúng trong dung dịch Clorin 1 % hoặc Sodium hypochlorite. Sau đó tiến hành làm như đối với hạt tươi.
Sau 4 - 5 ngày hạt sẽ mọc. Chuẩn bị những ống nghiệm để trồng cây giữ trong môi trường đồng nhất có chứa môi trường hỗn hợp Murshige và Skoog + đường + agar, tiệt trùng ở 121oC trong 20 phút. Đặt hạt nảy mầm lên bề mặt agar trong các ống nghiệm nuôi cấy khi chồi bắt đầu mọc.
Khi chồi ghép đạt đến độ dài thích hợp 3 - 4 cm, sau 10 - 12 ngày đưa những ống nghiệm này vào trong buồng tối ở 4 - 7oC. Chọn các cây thẳng đưa vào buồng lạnh để ghép chồi đỉnh. Thời gian lưu giữ cây con là một năm.
3.4 Ghép đỉnh sinh trưởng.
Ngâm dụng cụ trong cồn 70% khoảng 1 giờ trước khi dùng. Chuẩn bị các mẩu dao cạo và tra vào cán. Nhúng dao cắt vào chất tẩy và sau đó làm sạch bằng cồn và hơ khô giữa mỗi lần cắt. Không làm cháy lưỡi dao sau khi nhúng cồn. Thay đổi lưỡi dao khi chúng bị cùn.
Tiệt trùng bề mặt cành ghép trực tiếp khi đang ở trên cây bằng dung dịch Clorin 0,5 % hoặc Sodium hypochlorite trong 5-10 phút, tuỳ thuộc vào điều kiện của cành ghép. Nếu chúng đã được tiệt trùng và trồng trong cát, chúng có thể được sử dụng ngay. Nếu chúng bị nhiễm bẩn thì đặt chúng trên vải màn và xử lý trong dung dịch Chlorin 0,01 % hoặc Sodium hypochlorite trong 1 phút sau đó rửa cẩn thận 3 lần trong nước lọc.
Cắt tỉa lá mầm và chồi bên, mở vết ghép hình chữ T và tiến hành ghép.
Loại bỏ hết lá ở cành ghép để lộ mô phân sinh. Sử dụng một lưỡi dao cho một mô phân sinh. Đặt mô phân sinh lên vết ghép và đóng nắp vết ghép lại. Đặt cây con trong giấy lọc và trồng trong ống nghiệm có hỗn hợp môi trường Murshige và Skoog + đường + muối sắt hoà tan + White's vitamin. Xử lý môi trường ở nhiệt độ 121oC trong 10 phút.
Giữ cây con ở nhiệt độ 28 oC với chu kỳ chiếu sáng là 16 giờ. Chăm sóc cây tối thiểu 4 - 6 tuần hoặc có thể dài hơn. Cây con có thể cần được cắt tỉa mầm ở giai đoạn sinh trưởng trong ống nghiệm và có thể chuyển vào môi trường mới .
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Sau 4 - 6 tuần, khi mắt ghép đã mọc chồi được 1 cm cùng với 2 lá, đưa cây con ra khỏi ống nghiệm, tỉa bớt rễ và trồng cây trong chậu có chứa hỗn hợp chất độn. Giữ cây trong điều kiện ánh sáng yếu trong tuần đầu tiên. Duy trì ẩm độ cao trong vài ngày đầu bằng cách dùng tấm nhựa che phủ cây con. Khi cây cứng cáp ta loại bỏ dần tấm nhựa che phủ. Có thể sử dụng các biện pháp tương tự như trên nếu thấy mắt ghép còn xanh nhưng chưa phát triển. Hàng ngày tưới 2g/l Ca(NO3)2. Kiểm tra các dòng ghép để khẳng định đã loại bỏ hết các bệnh.
3.6. Mụi truờng nuụi cấy.
Môi trường
Các hợp chất
Hàm lượng
Rắn
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Dung dịch muối cơ bản
KNO3
1,90 g/l
1,90 g/l
Murashige & Skoog
NH4NO3
1,65 g/l
1,65 g/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
440 mg/l
440 mg/l
MgSO4.7H2O
370 mg/l
370 mg/l
KH2PO4
170 mg/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
MnSO4.H2O
16,9 mg/l
16,9 mg/l
ZnSO4.7H2O
8,6 mg/l
8,6 mg/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
6,2 mg/l
6,2 mg/l
Kl
0,82 mg/l
0,82 mg/l
Na2MoO4.2H2O
0,25 mg/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
CuSO4.5H2O
0,025 mg/l
0,025 mg/l
CoCl2.6H2O
0,025 mg/l
0,025 mg/l
Muối sắt hoà tan
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
-
37,3 mg/l
FeSO4.7H2O
-
27,8 mg/l
Một số chất khác
Myo-I-Inositol
-
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Nicotinic
-
27,8 mg/l
Pyridoxine
-
100,0 mg/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
-
1,0 mg/l
Đường
Sucrose
30 g/l
1,00,2 mg/l
Agar
Agar
10 g/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
KIỂM DỊCH THỰC VẬT SAU NHẬP KHẨU
1. Kiểm tra Kiểm dịch Sau nhập khẩu.
Bảng 1. Các phương pháp kiểm tra.
Phản ứng chuỗi Polymerasa
Sử dụngchẩn đoán một số loại bệnh ẩn.
Men liên kết miễn dịch
Citrus tristeza closterovirus ( Virus tàn lụi cam quýt)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Xylella fastidiosa
Spiroplasma citri
Satsuma dwarf ilarvirus (Virus lùn Satsuma)
Citrus tatter leaf capillovirus (Virus nhỏ lá cam quýt)
Chỉ thị sinh học
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Các giống cây chỉ thị
Citrus sinensis
Maltese Blood or Ruby Blood
Psorosis complex (Tổ hợp Virus bệnh đốm)
(Cam)
Spiroplasma citri
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Liberobacter asiaticum
Liberobacter africanum
Citrus limon
Lambert Eureka (Chanh Eureka)
Citrus tristeza closterovirus, yellows strain (Virus tàn lụi cam quýt)
(Chanh)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Citrus variegation ilarvirus
Citrus medica L.
(Chanh yên)
Etrog (Chanh Yên)
Citrus exocortis viroid (Viroid vẩy vỏ)
Citrus aurantifolia
West Indian lime (Chanh Tây ấn)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
(Quýt)
Citrus veinenation virus (Virus biến dạng gân lá)
Poncirus trifoliata X C. sinensis
Rusk or Swingle, Citrange (Rusk or Swingle chanh)
Citrus tatter leaf capillovirus (Nhỏ lá cam quýt)
1.1. Phương pháp PCR.
Mỗi loài sinh vật có cấu trúc DNA khác nhau và trong cùng một giống giữa các loài cũng có sự khác nhau. Trong một giống, DNA của các loài có những đoạn cấu trúc giống nhau, nhưng có những đoạn có cấu trúc khác nhau mà cấu trúc này đặc trưng cho loài này mà những loài khác không có. Đây là cơ sở di truyền để phân biệt giữa loài này và loài khác. Phương pháp PCR chính là nhằm nhân lên gấp bội số lượng các đoạn DNA đặc trưng để từ đó có thể chẩn đoán chính xác được các loài.
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Kỹ thuật này cơ bản được dựa trên sự kết hợp giữa men với các kháng thể hoặc kháng nguyên thành vật đánh dấu men sau đó chúng lại có phản ứng với kháng nguyên hoặc kháng thể tương ứng thành hợp chất miễn dịch của men đánh dấu. Men kết hợp tại hợp chất miễn dịch khi gặp chất đệm sẽ thúc đẩy phản ứng thuỷ phân chất đệm tạo ra màu vàng. Tốc độ của phản ứng thuỷ phân càng nhanh, màu vàng càng rõ, chứng tỏ men càng nhiều, điều này cũng chứng tỏ nồng độ của kháng nguyên càng cao. Do tính đặc hiệu của phản ứng ELISA ta có thể xác định được định lượng và định tính của kháng nguyên.
Bộ Kit để kiểm tra có thể sử dụng cho các bệnh sau:
- Xylella fastidiosa
- Spiroplasma citri
- Satsuma dwarf ilarvirus (Lùn Satsuma)
- Citrus tristeza closterovirus (Tàn lụi cây có múi)
- Citrus tatter leaf cappillovirus (Virus nhỏ lá cây có múi)
1.3 Chỉ thị sinh học
Dùng cây chỉ thị để xác định những bệnh ẩn của cây có múi ở hai mức nhiệt độ:
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- Viruses Citrus tristeza closterovirus (Virus tàn lụi cây có múi)
- Citrus veinenation virus (Virus biến dạng gân lá cây có múi)
- Citrus varegation ilarvirus.
- Citrus leaf rugose virus (Vius quăn lá cây có múi)
- Citrus tatter leaf capillovirus (Virus bé lá cây có múi)
* Nhiệt độ 25 - 35oC (tốt nhất là 30 - 35 oC) cho tác nhân gây bệnh:
- citrus exocortis viroid (Viroid vảy vỏ cây có múi)
- citrus cachexia viroid (Viroid mạch dẫn cây có múi)
- Spiroplasma citri
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- Liberobacter africanum
Bảng 1.3.1 Số cây chỉ thị cần nhân giống.
Dải nhiệt độ
Cây chỉ thị
Số chậu (15cm)
Số cây trong chậu
Lạnh 18-25oC
Sweet Orange (Cam ngọt)
3
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Eureka Lemon (Chanh Eureka)
2
5
West Indian Lime (Chanh Tây ấn)
2
5
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2
5
Nóng 25-35oC
Sweet Orange (Cam ngọt)
3
5
Etrog Citron Rooted (Chanh yên)
2
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Bảng 1.3.2. Cây chỉ thị cho kiểm tra bệnh.
Bệnh
Cây chỉ thị thích hợp
Cây chỉ thị khác
Cachexia (Xyloporosis)
Etrog citron (Chanh yên)
Rough lemon (Chanh sần)
Poncirus trifoliata
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
West Indian lime (Chanh Tây ấn)
Citrus limon
Duncan grapefruit Red (Bưởi đỏ Duncan)
Citrus variegation (Virus biến dạng)
Etrog citron (Chanh yên)
Bean and cowpea (Đậu tương và đậu đen)
Crinkly leaf (Giòn lá)
Eureka lemon (Chanh Eureka)
-
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Sweet orange (Cam ngọt)
Orlando tangelo (Quýt Orlando)
Sour orange (Cam chua)
Exocortis (Vảy vỏ)
Etrog citron (Chanh yên)
Rough lemon (Chanh sần)
Greening and Dieback
(chết khô)
Sweet orange (Cam ngọt)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Duncan grapefruit (Bưởi Duncan)
Impietratura
Sweet orange (Cam ngọt)
Grapefruit (Bưởi)
Psorosis complex (Tổ hợp bệnh đốm Virus)
Sweet orange (Cam ngọt)
Homosassa, Emperor mandarin (Quýt Homosassa, Emperor)
West Indian lime (Chanh Tây ấn)
Ringspot (Psorosis B ) (Đốm vòng dòngB)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
-
Satsuma dwarf (Lùn Satsuma)
Satsuma mandarin (Quýt Satsuma)
Sesamum indicum
Stubborn
Sweet orange (Cam ngọt)
Sexton tangelo (Quýt Sexton)
Duncan grapefruit (Bưởi Duncan)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
(Nhỏ lá/Lùn cây)
Citrange (Chanh)
Troyer citrange (Chanh Troyer)
Citrus excelsa cowpea Nicotiana clevelandii
Tristeza - Stem pitting and Seedling Yellows (2 chủng tàn lụi cam quýt)
West Indian lime (Chanh Tây ấn) Eureka lemon (Chanh Eureka)
Sour orange (Cam chua)
Mexica lime (Chanh Mexica)
Bitter sweet seville (Cam đắng ngọt Seville)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Vein Enation/ Woody Gall (Biến dạng gân/U thân gỗ)
West Indian lime (Chanh Tây ấn)
Rough lemon (Chanh sần)
Bảng 1.3.3. Triệu chứng bệnh trên cây chỉ thị
Dải nhiệt độ
Bệnh
Sweet Orange
(Cam ngọt)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
West Indian Lime (Chanh Tây ấn)
Citrange cv Rusk or Swingle (Chanh, bưởi hoặc quýt)
Citrus medica L. (Chanh yên)
Citrus leaf rugose
(Quăn lá)
CF
LP
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Citrus variegation
(Biến dạng gân lá)
AS
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Crinkly leaf
(Giòn lá)
AS
LP
Cristacortis
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Impietratura
OL
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Lạnh
Psorosis A
(Đốm lá dòng A)
CF
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Psorosis B
(Đốm lá dòng B)
OL
Tatter Leaf / Stunt
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
CM &S
Tristeza - Stempitting
(Đốm tàn lụi)
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
CVF&WP
Tristeza - Yellows
(Vàng tàn lụi)
LY & S
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Veinenation / Woody Gall (Biến dạng/u thân gỗ)
VE
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
LE
Nóng
Greening and Dieback (Greening và khô cành)
VY & LM
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Stubborn
CM
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
AS - Asteroid spots (Đốm dạng sao) CF - Chlorotic flecks (Đốm vàng)
CM - Chlorotic mottling (Đốm mất màu) CVF - Chlorotic vein flecking (Đốm màu vàng gân)
LE - Leaf epinasty LM - Leaf mottle (Đốm lá)
LP - Leaf puckering (Nhăn lá) LY - Leaf yellowing (Vàng lá)
OL - Oak leaf pattern (Dải sùi lá) S - Stunting (Lùn cây)
VE - Veinenation (Biến dạng gân) VY - Vein yellowing (Vàng gân)
WP - Wood pitting (Đốm thân gỗ)
2. Nhân giống, chăm sóc và bảo quản tại cơ sở Sau nhập khẩu.
2.1. Nhân gốc ghép và cây chỉ thị.
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Trước khi sử dụng làm cây chỉ thị hoặc gốc ghép không bón thúc cho cây. Sau đó chuyển chúng vào chậu hoặc túi nilon chứa được 1,5-2,0 kg cơ chất có chứa hỗn hợp theo công thức của Trường Đại học California. Nếu cây biểu hiện triệu chứng thiếu dinh dưỡng thì sẽ bón bổ sung bằng hỗn hợp chất độn với tỷ lệ 1 máu khô và bột xương: 1 Dolomit. Sau đó chanh yên và một số loại cam ngọt được trồng trong điều kiện nhiệt độ 30 - 35oC.
2.2. Nhân giống từ mắt ghép.
Hai cây được nhân giống từ mắt ghép trên gốc chanh sần. Ba đến bốn tuần sau khi ghép mắt, cắt các chồi nách của chanh sần để tập trung cho mắt ghép phát triển.
Chọn một cây làm cây chỉ thị. Nếu cần thì tiến hành ghép đỉnh sinh trưởng. Cây con được nhân lên từ cây chỉ thị sẽ được trả lại cho chủ hàng.
2.3. Phòng trừ dịch hại.
Sử dụng thuốc hoá học, dầu thực vật và thuốc sinh học để phòng trừ sinh vật hại trong nhà kính. Các sinh vật hại thường có nhện hai chấm, nhện to bụng, rệp phấn, rệp sáp. Chú ý rệp muội đen trên cây có múi phải được sớm diệt trừ triệt để nhằm ngăn chặn việc truyền Virus.
3. Loại bỏ các tác nhân gây bệnh và nhân giống.
Ghép đỉnh sinh trưởng là kỹ thuật nhân dòng các giống cây có múi đã được loại bỏ bệnh, cùng với khả năng tạo ra những dòng mới sạch Virus và các tác nhân gây bệnh khác. Tất cả cây có múi mới phải được ghép đỉnh sinh trưởng ít nhất một lần trước khi xuất ra khỏi cơ sở Kiểm dịch Sau nhập khẩu. Điều này có nghĩa là đảm bảo sạch Xanthomonas campestris pv. citrumelo, phytoplasma, Viroid và Virus. Các bước kiểm tra được làm nhiều lần đến khi cho kết quả kiểm tra khẳng định là sạch bệnh. Những gốc ghép được sản xuất từ các tổ chức trên thế giới có chứng nhận đạt tiêu chuẩn thì không cần phải ghép lại ở Việt Nam.
3.1. Mắt ghép dùng ghép đỉnh sinh trưởng.
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Nếu có chồi ghép mới nhập không thích hợp cho việc ghép ban đầu các mắt ghép được ghép vào thân một cây mẹ và sau đó chọn mắt ghép và thời điểm thích hợp nhất để tiến hành ghép.
3.2. Xử lý mắt ghép để ghép đỉnh sinh trưởng.
Tiệt trùng bề mặt mắt ghép trước khi bắt đầu ghép. Nhúng mắt ghép trong dung dịch Ethanol 70 % trong 2 phút, sau đó nhúng trong dung dịch Clorin (Clo) 0,2% hoặc Sodium hypochrorite trong 10 phút. Bảo quản mắt ghép ở nhiệt độ 26oC trong cát ẩm đã tiệt trùng với chu kỳ chiếu sáng 16 giờ đến khi đem ra sử dụng.
3.3. Sản xuất gốc ghép để ghép đỉnh sinh trưởng.
Sử dụng chanh ba lá, chanh sần và bưởi Citrus grandis (chỉ dùng cho các giống bưởi Pomelo) làm gốc ghép.
Lấy hạt từ quả tươi sau đó rửa sạch thịt quả. Tách bỏ lớp vỏ ngoài của hạt và bảo quản trong giấy lọc ẩm đến khi đem ra sử dụng. Khử trùng bề mặt hạt trong dung dịch Clorin 0,5 % hoặc Sodium hypochlorite (có chứa 1% clo) trong 10 phút. Sau đó rửa kỹ trong nước đã tiệt trùng tối thiểu 3 lần. Đưa hạt vô trùng vào trong môi trường Agar sạch để trong buồng cấy, sau đó đưa vào tủ ấm ở 26 oC trong bóng tối.
Nếu hạt không dùng ngay sau khi đã tách khỏi quả, ta phơi trên giá đỡ. Hạt được tiệt trùng bề mặt và được bảo quản bằng cách nhúng trong dung dịch Clorin 1 % hoặc Sodium hypochlorite. Sau đó tiến hành làm như đối với hạt tươi.
Sau 4 - 5 ngày hạt sẽ mọc. Chuẩn bị những ống tuýp để trồng cây giữ trong môi trường đồng nhất có chứa môi trường hỗn hợp Murshige và Skoog + đường + agar, tiệt trùng ở 121oC trong 15-20 phút. Đặt hạt nảy mầm lên bề mặt agar trong các ống tuýp nuôi cấy khi chồi bắt đầu mọc.
Khi chồi ghép đạt đến độ dài thích hợp 3 - 4 cm, sau 10 - 12 ngày đưa những ống tuýp này vào trong buồng tối ở 4 - 7oC. Chọn các cây thẳng đưa vào buồng lạnh để ghép chồi đỉnh. Thời gian lưu giữ cây con là một năm.
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Ngâm dụng cụ trong cồn 70% khoảng 1 giờ trước khi dùng. Chuẩn bị các mẩu dao cạo và tra vào cán. Nhúng dao cắt vào chất tẩy và sau đó làm sạch bằng cồn và hơ khô giữa mỗi lần cắt. Không làm cháy lưỡi dao sau khi nhúng cồn. Thay đổi lưỡi dao khi chúng bị cùn.
Tiệt trùng bề mặt cành ghép trực tiếp khi đang ở trên cây bằng dung dịch Clorin 0,5 % hoặc Sodium hypochlorite trong 5-10 phút, tuỳ thuộc vào điều kiện của cành ghép. Nếu chúng đã được tiệt trùng và trồng trong cát, chúng có thể được sử dụng ngay. Nếu chúng bị nhiễm bẩn thì đặt chúng trên vải màn và xử lý trong dung dịch Chlorin 0,01 % hoặc Sodium hypochlorite trong 1 phút sau đó rửa cẩn thận 3 lần trong nước lọc.
Cắt tỉa lá mầm và chồi bên, mở vết ghép hình chữ T và tiến hành ghép.
Loại bỏ hết lá ở cành ghép để lộ mô phân sinh. Sử dụng một lưỡi dao cho một mô phân sinh. Đặt mô phân sinh lên vết ghép và đóng nắp vết ghép lại. Đặt cây con trong giấy lọc và trồng trong ống tuýp có hỗn hợp môi trường Murshige và Skoog + đường + muối sắt hoà tan + White's vitamin. Xử lý môi trường ở nhiệt độ 121oC trong 10 phút.
Giữ cây con ở nhiệt độ 28 oC với chu kỳ chiếu sáng là 16 giờ. Chăm sóc cây tối thiểu 4 - 6 tuần hoặc có thể dài hơn. Cây con có thể cần được cắt tỉa mầm ở giai đoạn sinh trưởng trong ống tuýp và có thể chuyển vào môi trường mới .
3.5. Chuyển cây con đã được ghép đỉnh sinh trưởng ra khỏi ống tuýp.
Sau 4 - 6 tuần, khi mắt ghép đã mọc chồi được 1 cm cùng với 2 lá, đưa cây con ra khỏi ống tuýp, tỉa bớt rễ và trồng cây trong chậu có chứa hỗn hợp chất độn. Giữ cây trong điều kiện ánh sáng yếu trong tuần đầu tiên. Duy trì ẩm độ cao trong vài ngày đầu bằng cách dùng tấm nhựa che phủ cây con. Khi cây cứng cáp ta loại bỏ dần tấm nhựa che phủ. Có thể sử dụng các biện pháp tương tự như trên nếu thấy mắt ghép còn xanh nhưng chưa phát triển. Hàng ngày tưới 2g/l Ca(NO3)2. Kiểm tra các dòng ghép để khẳng định đã loại bỏ hết các bệnh.
3.6. Mụi truờng nuụi cấy.
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Các hợp chất
Hàm lượng
Rắn
Lỏng
Murashige & Skoog
KNO3
1,90 g/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
dung dịch muối cơ bản
NH4NO3
1,65 g/l
1,65 g/l
CaCl2.2H2O
440 mg/l
440 mg/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
370 mg/l
370 mg/l
KH2PO4
170 mg/l
170 mg/l
MnSO4.H2O
16,9 mg/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
ZnSO4.7H2O
8,6 mg/l
8,6 mg/l
H3BO3
6,2 mg/l
6,2 mg/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,82 mg/l
0,82 mg/l
Na2MoO4.2H2O
0,25 mg/l
0,25 mg/l
CuSO4.5H2O
0,025 mg/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
CoCl2.6H2O
0,025 mg/l
0,025 mg/l
Muối sắt hoà tan
Na2-EDTA
-
37,3 mg/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
-
27,8 mg/l
Một số các chất khác
Myo-I-Inositol
-
37,3 mg/l
Axit Nicotinic
-
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Pyridoxine
-
100,0 mg/l
Thiamine HCl
-
1,0 mg/l
...
...
...
Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
30 g/l
1,00,2 mg/l
Agar
Agar
10 g/l
75 g/l
(Không có nội dung)
Vì chưa Đăng Nhập nên Bạn chỉ xem được Thuộc tính của Văn bản. Bạn chưa xem được Hiệu lực của Văn bản, Văn bản Liên quan, Văn bản thay thế, Văn bản gốc, Văn bản tiếng Anh,...
Nếu chưa có Tài khoản, mời Bạn Đăng ký Tài khoản tại đây
(Không có nội dung)
Vì chưa Đăng Nhập nên Bạn chỉ xem được Thuộc tính của Văn bản. Bạn chưa xem được Hiệu lực của Văn bản, Văn bản Liên quan, Văn bản thay thế, Văn bản gốc, Văn bản tiếng Anh,...
Nếu chưa có Tài khoản, mời Bạn Đăng ký Tài khoản tại đây
Vì chưa Đăng Nhập nên Bạn chỉ xem được Thuộc tính của Văn bản. Bạn chưa xem được Hiệu lực của Văn bản, Văn bản Liên quan, Văn bản thay thế, Văn bản gốc, Văn bản tiếng Anh,...
Nếu chưa có Tài khoản, mời Bạn Đăng ký Tài khoản tại đây
-
Ban hành: {{m.News_Dates_Date}} Hiệu lực: {{m.News_EffectDate_Date}} Tình trạng: {{m.TinhTrang}} Cập nhật: {{m.Email_SendDate_Date}} Ban hành: {{m.News_Dates_Date}}Hiệu lực: {{m.News_EffectDate_Date}}Tình trạng: {{m.TinhTrang}}Cập nhật: {{m.Email_SendDate_Date}}
Vì chưa Đăng Nhập nên Bạn chỉ xem được Thuộc tính của Văn bản. Bạn chưa xem được Hiệu lực của Văn bản, Văn bản Liên quan, Văn bản thay thế, Văn bản gốc, Văn bản tiếng Anh,...
Nếu chưa có Tài khoản, mời Bạn Đăng ký Tài khoản tại đây
-
Ban hành: {{m.News_Dates_Date}} Hiệu lực: {{m.News_EffectDate_Date}} Tình trạng: {{m.TinhTrang}} Cập nhật: {{m.Email_SendDate_Date}} Ban hành: {{m.News_Dates_Date}}Hiệu lực: {{m.News_EffectDate_Date}}Tình trạng: {{m.TinhTrang}}Cập nhật: {{m.Email_SendDate_Date}}
Vì chưa Đăng Nhập nên Bạn chỉ xem được Thuộc tính của Văn bản. Bạn chưa xem được Hiệu lực của Văn bản, Văn bản Liên quan, Văn bản thay thế, Văn bản gốc, Văn bản tiếng Anh,...
Nếu chưa có Tài khoản, mời Bạn Đăng ký Tài khoản tại đây
Vì chưa Đăng Nhập nên Bạn chỉ xem được Thuộc tính của Văn bản. Bạn chưa xem được Hiệu lực của Văn bản, Văn bản Liên quan, Văn bản thay thế, Văn bản gốc, Văn bản tiếng Anh,...
Nếu chưa có Tài khoản, mời Bạn Đăng ký Tài khoản tại đây